枯草芽孢桿菌的啟動(dòng)子篩選
2016/8/16 10:04:01點(diǎn)擊：
枯草芽孢桿菌因其獨(dú)特的代謝途徑、常被用于合成生物學(xué)和代謝工程，因此，需要對(duì)其內(nèi)在生物部件進(jìn)行評(píng)估，目的是確定最佳策略來(lái)調(diào)節(jié)代謝通路和表達(dá)目標(biāo)蛋白。通過(guò)報(bào)告基因表達(dá)量（如綠色熒光蛋白的熒光單位）評(píng)估啟動(dòng)子強(qiáng)弱是一種常用方法。中國(guó)科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所張大偉課題組對(duì)枯草芽孢桿菌的啟動(dòng)子作了篩選與鑒定，相關(guān)結(jié)果發(fā)表在《PLOS ONE》雜志上。
在這項(xiàng)研究中，研究人員測(cè)試了84個(gè)、分布在不同蛋白上游的預(yù)測(cè)啟動(dòng)子，不同蛋白包括熱激蛋白和細(xì)胞壁蛋白等。測(cè)試發(fā)現(xiàn)84個(gè)啟動(dòng)子的活性是最強(qiáng)啟動(dòng)子P43的0.0023-4.53倍不等。這些啟動(dòng)子在高溫或是有乙醇的培養(yǎng)基中的活性變化不大，但有些在高滲透壓下活性有所提高。從中隨機(jī)挑選了啟動(dòng)子用于啟動(dòng)耐熱β-半乳糖苷酶的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄水平相當(dāng)，說(shuō)明這些啟動(dòng)子可在不同遺傳背景下發(fā)揮作用。此外，從中挑選的啟動(dòng)子可使胞質(zhì)β-半乳糖苷酶和α-淀粉酶（分泌蛋白）的轉(zhuǎn)錄分別提高4倍和2倍。這項(xiàng)研究所得到的數(shù)據(jù)使得我們對(duì)枯草芽孢桿菌的代謝有了更深的了解，便于我們今后對(duì)它的改造利用。
在這項(xiàng)研究中，研究人員測(cè)試了84個(gè)、分布在不同蛋白上游的預(yù)測(cè)啟動(dòng)子，不同蛋白包括熱激蛋白和細(xì)胞壁蛋白等。測(cè)試發(fā)現(xiàn)84個(gè)啟動(dòng)子的活性是最強(qiáng)啟動(dòng)子P43的0.0023-4.53倍不等。這些啟動(dòng)子在高溫或是有乙醇的培養(yǎng)基中的活性變化不大，但有些在高滲透壓下活性有所提高。從中隨機(jī)挑選了啟動(dòng)子用于啟動(dòng)耐熱β-半乳糖苷酶的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄水平相當(dāng)，說(shuō)明這些啟動(dòng)子可在不同遺傳背景下發(fā)揮作用。此外，從中挑選的啟動(dòng)子可使胞質(zhì)β-半乳糖苷酶和α-淀粉酶（分泌蛋白）的轉(zhuǎn)錄分別提高4倍和2倍。這項(xiàng)研究所得到的數(shù)據(jù)使得我們對(duì)枯草芽孢桿菌的代謝有了更深的了解，便于我們今后對(duì)它的改造利用。
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